自2010版藥典開始，每五年一次的藥典升級(jí)都對(duì)微生物檢驗(yàn)的要求上一個(gè)臺(tái)階，留在記憶里的2015版藥典升級(jí)前的那些日子仍舊歷歷在目，讓我們?cè)?020版藥典升級(jí)前回顧一下2015版升級(jí)前的那些點(diǎn)滴，以準(zhǔn)備迎接即將到來(lái)的2020版。

【備注】

以下文章為2015年編寫，僅為了拋磚引玉。

1、自查2015版是否做到位做扎實(shí)；

2、其中有些應(yīng)對(duì)方法（該方法指的是管理和應(yīng)對(duì)策略）可對(duì)2020版的升級(jí)準(zhǔn)備有所啟發(fā)和借鑒。

ROUND 5

2015版中國(guó)藥典微生物項(xiàng)變化的應(yīng)對(duì)策略—設(shè)備（一）

依據(jù)以下條款，15版藥典微生物項(xiàng)對(duì)設(shè)備方面的挑戰(zhàn)大的是以下2大設(shè)備：無(wú)菌檢查用隔離器（若企業(yè)決定使用B+A請(qǐng)自動(dòng)忽略）和微生物鑒定系統(tǒng)，余下就是已有設(shè)備的增減，如培養(yǎng)箱、生物安全柜、超凈臺(tái)等。

1、《9203 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》中“環(huán)境”項(xiàng)下的提到“微生物實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)工作應(yīng)在專屬的區(qū)域進(jìn)行，以降低交叉污染、假陽(yáng)性結(jié)果和假陰性結(jié)果出現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)。無(wú)菌檢查應(yīng)在B級(jí)背景下的*單向流潔凈區(qū)域或隔離器系統(tǒng)中進(jìn)行，微生物限度檢查應(yīng)在不低于D級(jí)背景下的B級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。*和B級(jí)區(qū)域的空氣供給應(yīng)通過終端高效空氣過濾器（HEPA）”。

2、《9206 無(wú)菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則》

3、《9205 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則》中“5.微生物鑒定”中提到“建議對(duì)受控環(huán)境收集到的微生物進(jìn)行適當(dāng)水平的鑒定，微生物菌群信息有助于預(yù)期常見菌群，并有助于評(píng)估清潔/消毒規(guī)程、方法、清潔/消毒劑及微生物監(jiān)測(cè)方法的有效性，尤其當(dāng)超過監(jiān)測(cè)限度時(shí)，微生物鑒定信息有助于污染源的調(diào)查。關(guān)鍵區(qū)域分離到的菌落應(yīng)先于非關(guān)鍵區(qū)域進(jìn)行鑒定。”

4、《9204 微生物鑒定指導(dǎo)原則》

5、《1101 無(wú)菌檢查法》、《1105 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法》、《1106 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法》中霉菌及酵母菌的復(fù)蘇及供試品培養(yǎng)溫度及控制菌的培養(yǎng)溫度有所變化。

一、 無(wú)菌檢查用隔離器

國(guó)內(nèi)現(xiàn)在使用隔離器用作無(wú)菌檢查的企業(yè)還是很少的，我們是12年進(jìn)行的隔離器招標(biāo)，當(dāng)時(shí)使用的企業(yè)更少，當(dāng)時(shí)我是個(gè)27歲的女孩子，對(duì)于設(shè)備的了解大家也可想而知，硬著頭皮打了很多電話去各個(gè)企業(yè)和藥檢所咨詢品牌和使用情況，上海地區(qū)也是*的幾家企業(yè)有，因?yàn)轭A(yù)算的關(guān)系終選定國(guó)產(chǎn)廠家的雙人四手套的單面硬體層流式的隔離器。

這里我確實(shí)有話要說(shuō)，而且是發(fā)自肺腑的，我想很多企業(yè)設(shè)備部的老大都會(huì)說(shuō)這種東西又沒有什么技術(shù)含量，就幾塊鐵皮拼拼起來(lái)要那么貴嗎？但是實(shí)際使用和溝通下來(lái)，無(wú)菌檢查用的隔離器真的有別于生產(chǎn)線上的隔離系統(tǒng)，它的細(xì)節(jié)設(shè)計(jì)會(huì)決定無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)的成功率，做過無(wú)菌檢查的人都知道，很多供試品的操作和在套筒上的操作是需要精細(xì)化的，這就和生產(chǎn)線上很大程度上區(qū)分開來(lái)，所以隔離器的前期調(diào)研和設(shè)計(jì)太重要了！這里我不得不提一句，如果企業(yè)預(yù)算足夠的話，我個(gè)人建議購(gòu)買國(guó)外品牌的隔離器，當(dāng)然這個(gè)品牌在隔離器的生產(chǎn)特別是無(wú)菌檢查隔離器的生產(chǎn)方面要有一定經(jīng)驗(yàn)，這樣對(duì)客戶要求的理解、設(shè)備的定制設(shè)計(jì)、后續(xù)的驗(yàn)證、實(shí)際使用時(shí)碰到的問題和定期維保等都會(huì)有非常大的幫助，而且其驗(yàn)證的工程師等都非常有經(jīng)驗(yàn)，連客戶大裝載的在隔離器內(nèi)的擺設(shè)位置等都給你設(shè)計(jì)好并且是有理有據(jù)的。我有一次邀請(qǐng)一位國(guó)外的隔離器生產(chǎn)廠家的銷售人員來(lái)我們公司針對(duì)我們使用的隔離器聊了一個(gè)多小時(shí)，真的深有感觸，他能把很多技術(shù)問題解釋得很清楚，這點(diǎn)來(lái)說(shuō)國(guó)內(nèi)真的還有很長(zhǎng)的一段路要走，因?yàn)橥庥^很容易模仿而且非常容易做的很漂亮，但是設(shè)計(jì)的細(xì)節(jié)和人員的技術(shù)能力相信還是需要些年頭的，希望國(guó)內(nèi)的生產(chǎn)企業(yè)能夠加快步伐。

基本現(xiàn)在市面上的無(wú)菌檢查用隔離器都是定制款，因?yàn)橐鶕?jù)客戶的一次大檢驗(yàn)量等需求進(jìn)行設(shè)計(jì)和定制，當(dāng)時(shí)我們?cè)谠O(shè)計(jì)要求方面因?yàn)榻?jīng)驗(yàn)不足確實(shí)留下了一些后續(xù)工作，雖然都能處理，但是個(gè)人覺得還是有不盡如人意的地方。以下就我的個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，選幾個(gè)比較重要的點(diǎn)討論一下：

1、 放置環(huán)境

《9206 無(wú)菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則》中寫到“無(wú)菌檢查用隔離器安裝環(huán)境的潔凈度要求建議不低于我國(guó)現(xiàn)行GMP中D級(jí)空氣潔凈度要求”。

首先得考慮隔離器放置的環(huán)境是否能夠滿足該臺(tái)隔離器（如有需要配備傳遞艙也一并考慮）的放置，應(yīng)保證安裝地點(diǎn)周圍有足夠空間，至少滿足正常物品的傳送以及一些正常維保維護(hù)的需要。如果使用集成的滅菌設(shè)備，已經(jīng)集成在隔離器內(nèi)部那問題不大，若使用移動(dòng)式的必須考慮其放置位置；如果內(nèi)部接入在線粒子和在線浮游探頭進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)考慮外置設(shè)備的放置位置；如果隔離器設(shè)置穩(wěn)壓電源，則應(yīng)考慮穩(wěn)壓電源的放置位置，盡量以保證隔離器正常運(yùn)行但是不占用室內(nèi)空間為原則，事先應(yīng)進(jìn)行考慮和設(shè)計(jì)布置。

若放置在潔凈區(qū)中，如果隔離器是室內(nèi)采風(fēng)，那潔凈室的HEPA設(shè)置在什么位置，其風(fēng)量多大能夠保證隔離器和潔凈室內(nèi)都能夠維持要求的潔凈水平，隔離器的放置位置不能正對(duì)下風(fēng)口且不能擋住出風(fēng)口，應(yīng)盡可能少的影響室內(nèi)氣流走向。

若放置在非潔凈區(qū)，必須考慮房間溫濕度的控制，如過氧化氫的滅菌會(huì)依賴室內(nèi)采風(fēng)的室內(nèi)溫濕度。

若隔離器需要接入壓縮空氣（密封圈密封、氣動(dòng)閘等）或水（清潔腔體）等介質(zhì)，則需要考慮放置環(huán)境是否需排布相應(yīng)的管道以滿足需要。

2、 材質(zhì)

現(xiàn)在市面上基本接觸到的有三種：不銹鋼、硬質(zhì)塑料和軟質(zhì)塑料，前兩種即所謂硬艙體，后一種是軟艙體，第二種硬質(zhì)塑料曾經(jīng)接觸過一家國(guó)外的廠家使用的，樣機(jī)的照片非常可愛（女同胞們會(huì)比較喜歡），是標(biāo)準(zhǔn)化的配制加組合式的銷售。硬體和軟體其實(shí)各有特點(diǎn)，硬體一般艙內(nèi)會(huì)選用316不銹鋼，艙外會(huì)選用304不銹鋼，軟體一般為無(wú)毒PVC（聚氯乙烯）材質(zhì)（應(yīng)注意厚度）。

軟體的優(yōu)勢(shì)在于視覺觀察范圍及清晰度優(yōu)于硬體，但是時(shí)間久了膜容易老化需要定期更換整個(gè)膜體；人員手部的活動(dòng)不像硬體那么受限，可以更好的拿取艙體內(nèi)物品，操作更舒適；價(jià)格優(yōu)勢(shì)也是非常重要之一。

硬體的密封性相較于軟體有一定優(yōu)勢(shì)，若腔體內(nèi)使用尖銳物品不慎可能不需要擔(dān)心是否會(huì)破壞艙體的密封性；另外硬體的清潔較軟體的好進(jìn)行，畢竟軟體清潔時(shí)支撐點(diǎn)可能無(wú)硬體那么實(shí)感；再者硬體的視覺及使用感官上較軟體來(lái)的扎實(shí)，可能這個(gè)屬于中國(guó)人的傳統(tǒng)觀念。

其實(shí)主要還是看各個(gè)企業(yè)自己的實(shí)際需要和預(yù)算的水平。

3、 空氣處理系統(tǒng)

這個(gè)在指導(dǎo)原則中講的已經(jīng)比較清楚了，無(wú)論是層流還是湍流都是要保證，在靜態(tài)時(shí)，隔離器內(nèi)部環(huán)境的潔凈度要達(dá)到現(xiàn)行GMP中*的要求，因在操作過程中可能會(huì)產(chǎn)生顆粒，所以在動(dòng)態(tài)時(shí)未做要求，同時(shí)對(duì)空氣速率和換氣次數(shù)也未作要求。

在使用殺菌劑滅菌時(shí)，隔離器需密封嚴(yán)實(shí)以確保泄入周圍環(huán)境的揮發(fā)劑或氣體維持在相當(dāng)?shù)偷乃剑?dāng)與外界環(huán)境想通的門被打開時(shí)（即滅菌完畢通風(fēng)時(shí)），隔離器內(nèi)部必須維持正壓以保證無(wú)菌環(huán)境不被污染。

通常情況下，隔離器一般對(duì)周圍環(huán)境應(yīng)維持正壓，正常操作時(shí)，壓差范圍為20-50Pa（USP1208規(guī)定：壓差一般在20Pa或以上，使用時(shí)壓力不得超過廠家建議的限值），這里為什么要提一下，因?yàn)橛行﹪?guó)內(nèi)的隔離器廠家可能沒有對(duì)藥典的要求那么關(guān)注，所以大家一定在前期把這個(gè)要求提出來(lái)，在后階段的驗(yàn)證時(shí)，壓差是一個(gè)很重要的關(guān)注點(diǎn)。

4、 儀器儀表

這里我僅列舉大家常用的進(jìn)行探討，各自實(shí)驗(yàn)可能需要的其他儀器儀表就按各自需求進(jìn)行評(píng)估購(gòu)買。

1）、儀器

置于隔離器內(nèi)的儀器基本就是滅菌設(shè)備、集菌儀、浮游菌探頭、粒子探頭、手套檢漏儀。

現(xiàn)在很多的隔離器都是選用過氧化氫滅菌的，也不排除有使用臭氧和過氧乙酸滅菌的，設(shè)備可以集成在隔離器內(nèi)部，也可以使用分體式的，這種分體式的也可以用來(lái)進(jìn)行潔凈室滅菌，當(dāng)然滅菌要考慮潔凈室大小。過氧化氫的滅菌技術(shù)我在這里就不作說(shuō)明了，各家有各家的特點(diǎn)，但一定要注意的是腔體內(nèi)溫濕度的控制還有就是滅菌氣體發(fā)生器的進(jìn)氣與排氣的管路的在設(shè)備運(yùn)行時(shí)的開閉。

集菌儀基本都會(huì)在購(gòu)買隔離器的同時(shí)進(jìn)行合并購(gòu)買，并讓廠家做在隔離器內(nèi)部進(jìn)行使用，那集菌儀放置的位置就相當(dāng)重要，若一人操作，集菌儀可能就放在中間，若雙人操作，集菌儀可能放置在主操手的位置，這點(diǎn)是非常關(guān)鍵的，直接影響實(shí)驗(yàn)人員的使用感受（人家操作的不舒服實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量就一并打折扣），在設(shè)計(jì)時(shí)就應(yīng)該好好考慮，同時(shí)應(yīng)考慮操作人員手的長(zhǎng)度是否夠得到集菌儀上的關(guān)鍵操作位置，還有非常非常重要的一點(diǎn)！就是集菌儀的排水口設(shè)計(jì)在哪里？這點(diǎn)其實(shí)相當(dāng)?shù)闹匾残枰M(jìn)行實(shí)際測(cè)量。如果隔離器的下水口和集菌儀排液的管口是使用硅膠管連接的，那硅膠管如果有一定的彎曲死角，供試品實(shí)驗(yàn)時(shí)排水就會(huì)不暢，廢液累積在排液槽一方面上端排液有問題，另一方面若排液槽內(nèi)有微生物那因?yàn)閺U液的液面高度可能會(huì)污染套筒底部。所以集菌儀不單是那么簡(jiǎn)單的嵌入隔離器內(nèi)部即可，其一些配套原件的設(shè)計(jì)位置也是需要重點(diǎn)考慮的。這里再額外提一下排水的問題，因?yàn)榕潘膯栴}會(huì)導(dǎo)致隔離器內(nèi)腔與外部會(huì)有一個(gè)孔，那有很多人可能就會(huì)想到密封性的問題，這里我咨詢過一個(gè)外企用了7、8年隔離器的公司，他們是這么解決的，我們隔離器后續(xù)也借鑒他們的使用方法，一般隔離器的使用流程是密封性測(cè)試→滅菌通風(fēng)→實(shí)驗(yàn)操作，在開啟隔離器運(yùn)行之前，就將隔離器下端的排水孔上的硅膠管與排液桶相連，排液桶使用的是可滅菌PP材質(zhì)，桶的蓋子是懸口的，上面打兩個(gè)孔，讓其變成一個(gè)二通蓋子，A通連接呼吸器，B通連接從隔離器下端排水孔連接下來(lái)的硅膠管，在使用前將桶蓋蓋好，B通的硅膠管頂部用牛皮紙或錫箔紙包好，整個(gè)桶進(jìn)行滅菌，滅菌完畢將B通的硅膠管與隔離器下水孔連接，并將B通的硅膠管夾住封閉。操作好上述步驟即進(jìn)行隔離器的運(yùn)行步驟，進(jìn)入可實(shí)驗(yàn)操作的階段，將B通的硅膠管放開進(jìn)行排液，這樣操作對(duì)于密封測(cè)試及滅菌步驟均無(wú)影響，且正常實(shí)驗(yàn)時(shí)艙體為正壓，且排液桶已經(jīng)過滅菌，降低外接物品對(duì)艙體的影響。

對(duì)于環(huán)境檢測(cè)的設(shè)備，浮游菌和粒子的探頭也是需要考慮布置在何處的，這個(gè)必須經(jīng)評(píng)估得出，如果預(yù)算有限，無(wú)法配制相應(yīng)的監(jiān)測(cè)設(shè)備，則在隔離器的設(shè)計(jì)時(shí)可以先預(yù)留至少三個(gè)外接口以備后續(xù)使用。當(dāng)然也必須通過其他手段在實(shí)驗(yàn)中監(jiān)控微生物，如放置沉降碟、表面微生物或擦拭取樣等。

手套檢漏儀這個(gè)設(shè)備我個(gè)人覺得沒有很大意義，檢測(cè)原理和腔體內(nèi)的密封性測(cè)試一樣，反正我們當(dāng)初也買了，也就是定期檢測(cè)下手套，指導(dǎo)原則也推薦了微生物的檢測(cè)方法就是手套浸入0.1%的蛋白胨水然后薄膜過濾，大家可以根據(jù)需要選擇是否購(gòu)買。

2）儀表

隔離器作為無(wú)菌實(shí)驗(yàn)環(huán)境的保證，其需要控制的參數(shù)不少，那儀表就是非常重要的一個(gè)輸出工具，壓力表、溫濕度探頭、風(fēng)速探頭、滅菌劑的高低濃度探頭等。

我們隔離器經(jīng)過一次運(yùn)行，我們關(guān)注的參數(shù)有壓力、溫濕度、風(fēng)速和過氧化氫高低濃度。溫濕度探頭位于操作艙體內(nèi)用于監(jiān)測(cè)艙體溫度及濕度；風(fēng)速探頭位于操作艙內(nèi)的高效過濾器下端，用于監(jiān)測(cè)艙體風(fēng)速（我們是層流式的）；過氧化氫高濃度探頭位于操作艙內(nèi)過氧化氫噴淋頭邊，用于監(jiān)測(cè)滅菌時(shí)艙體內(nèi)過氧化氫濃度；過氧化氫低濃度探頭位于設(shè)備出風(fēng)口處，用于監(jiān)測(cè)過氧化氫排空濃度，當(dāng)該濃度＜1ppm時(shí)，設(shè)備自動(dòng)進(jìn)入生產(chǎn)模式，即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作；以上4個(gè)探頭在設(shè)備運(yùn)行過程中均可實(shí)時(shí)監(jiān)控并可打印數(shù)據(jù)曲線。

在指導(dǎo)原則上明確表示“需對(duì)隔離器的儀器儀表，比如過氧化氫傳感器、溫濕度傳感器、壓力傳感器等進(jìn)行定期校驗(yàn)”，其實(shí)這里我也有個(gè)困惑，就是過氧化氫傳感器，現(xiàn)在計(jì)量院沒辦法進(jìn)行校驗(yàn)，要送到國(guó)外去原廠校驗(yàn)，而且這個(gè)傳感器又是比較重要的，要么企業(yè)自備2個(gè)傳感器，要么和供應(yīng)商商量讓其常備在校驗(yàn)有效期內(nèi)的傳感器，不知道大家是如何解決的。

5、軟件

隔離器的軟件相當(dāng)重要，這是體會(huì)的一點(diǎn)，F(xiàn)AT前就必須和廠家詳細(xì)溝通，程序如何控制，程序運(yùn)行的穩(wěn)定性，程序運(yùn)行時(shí)需監(jiān)控的參數(shù)以及運(yùn)行完畢后可打印的報(bào)告及曲線等，目的就是確認(rèn)供應(yīng)商能將自己想實(shí)現(xiàn)的東西在軟件上實(shí)現(xiàn)。我們?cè)诟綦x器邊有一個(gè)觸摸屏可以控制和調(diào)閱參數(shù)，同時(shí)在普通房間也連接電腦可以實(shí)時(shí)監(jiān)控隔離器運(yùn)行時(shí)的情況，并在運(yùn)行完畢后貯存一些電子數(shù)據(jù)。

6、隔離系統(tǒng)的驗(yàn)證

這個(gè)真的是難講的一部分，在藥典的指導(dǎo)原則上也都是講一些原則性的東西，沒有特別細(xì)節(jié)的，大家其實(shí)可以參考USP1208，上面對(duì)于隔離器的3Q比CP稍微詳細(xì)一點(diǎn)，現(xiàn)就比較重要的2點(diǎn)和大家作個(gè)探討。

1） 滅菌參數(shù)的確認(rèn)

一般驗(yàn)證工程師會(huì)根據(jù)客戶的滿載量確定一個(gè)滅菌參數(shù)，如滅菌劑流量、是溫度控制還是時(shí)間控制、滅菌劑在腔體內(nèi)的駐留時(shí)間等等，這里我們需要考慮的是，我們腔體內(nèi)的滿載放置是否會(huì)影響到滅菌劑對(duì)腔體內(nèi)各個(gè)外表面微生物的殺滅情況，其實(shí)內(nèi)部物品（如支架、設(shè)備、手套）的放置位置都會(huì)影響到滅菌劑在腔體里的濃度分布，其實(shí)這個(gè)時(shí)候可以使用化學(xué)指示劑對(duì)可能難以殺滅的部位進(jìn)行布點(diǎn)，化學(xué)指示劑使用起來(lái)比較方便，滅菌劑對(duì)微生物殺滅幾個(gè)log，其色卡就會(huì)相應(yīng)有所變化。

當(dāng)然化學(xué)指示劑可以作為參考，終定性的還是生物指示劑，生物指示劑應(yīng)使用滅菌劑相應(yīng)的挑戰(zhàn)菌株進(jìn)行試驗(yàn)，如過氧化氫滅菌劑，在藥典的滅菌法中明確使用嗜熱脂肪芽孢桿菌進(jìn)行挑戰(zhàn)，在使用前至少應(yīng)確認(rèn)其孢子含量是否達(dá)標(biāo)，對(duì)于D值現(xiàn)在藥典還未規(guī)定（聽說(shuō)正式版在推進(jìn)這個(gè)事情，后續(xù)還結(jié)果不清楚），但在一些外企已規(guī)定需要測(cè)定D值。生物指示劑在腔體內(nèi)的擺放位置很有講究，一些未成功滅菌的點(diǎn)可能是因?yàn)橹甘緞[放有誤造成，一般指示劑的外包裝是Tyvek，里面含濾紙片或不銹鋼片，因?yàn)V紙片可能會(huì)吸收滅菌劑導(dǎo)致有一定殘留，一般推薦使用不銹鋼片。當(dāng)在隔離器中放置時(shí)，印有字體的一面應(yīng)朝向氣流，不能阻塞該面，理想上，其放置位置應(yīng)能讓氣流經(jīng)過Tyvek的兩面；在使用Tyvek包裝時(shí)，應(yīng)注意使用膠布固定時(shí)不要遮蓋Tyvek的表面，否則會(huì)阻礙氣流；避免在Tyvek表面標(biāo)記（因某些類型的筆墨會(huì)催化過氧化氫），通常應(yīng)標(biāo)記在膠布上；有些指示劑有僅需培養(yǎng)24h的，但還是建議培養(yǎng)時(shí)間滿足7天，避免假陰性結(jié)果。在這里必須提一句的是，大家一定要篩選質(zhì)量合格可靠的生物指示劑，供應(yīng)商或者代理商的專業(yè)程度也是相當(dāng)重要的，國(guó)外有些指示劑商品也真的不怎樣，前期的孢子含量測(cè)定等非常重要，要用數(shù)據(jù)說(shuō)話！

滅菌確認(rèn)符合要求后，滅菌報(bào)告的監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)必須設(shè)置一定的合格范圍以便日常使用時(shí)確認(rèn)滅菌效果，如滅菌劑注入流量、溫濕度、滅菌濃度、計(jì)算滅菌劑使用量等，這個(gè)是按各企業(yè)的滅菌劑不同及滅菌劑量時(shí)間的不同進(jìn)行確認(rèn)。

2） 包裝完整性測(cè)試

這里的包裝完整性測(cè)試的前提必須包括里面物品能承受的大滅菌次數(shù)以及在腔體內(nèi)的holding time。舉個(gè)例子，如果物品置于腔體內(nèi)滅菌，不進(jìn)行大滅菌次數(shù)的測(cè)試，則里面的物品僅可使用一次，測(cè)試完畢，不管用過或未使用的物品均需處理不可進(jìn)行二次使用。做這個(gè)驗(yàn)證需要考慮，可能腔體內(nèi)樣品可承受的大滅菌次數(shù)，一般為2次，另外滅菌完畢后的holding time是多久，比如今天滅菌實(shí)驗(yàn)是第二天做，那就必須考慮樣品及其他物品在腔體內(nèi)的存放時(shí)間。設(shè)計(jì)好大滅菌次數(shù)及holding time后，根據(jù)滅菌參數(shù)對(duì)腔體內(nèi)物品滅菌2次后放置估計(jì)的長(zhǎng)時(shí)間，然后再進(jìn)行包裝完整性測(cè)試，測(cè)試通過后，今后使用時(shí)，內(nèi)部物品經(jīng)滅菌2次后必須處理不得使用（即滅菌1次還可使用），物品滅菌完畢后在腔體內(nèi)的存放時(shí)間不得大于驗(yàn)證的holding time。

基本置于隔離器內(nèi)的物品在之前應(yīng)進(jìn)行評(píng)估是否密封以防止滅菌劑的侵入，但有些物品可能沒有使用的先例，需要進(jìn)行挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，在挑戰(zhàn)之前，有一個(gè)小方法可能可以輔助確定是否有過氧化氫滲入，這個(gè)方法我沒有用過，也是比較老師培訓(xùn)時(shí)推薦的，大家有興趣可以試用下，比較簡(jiǎn)單易行，但后續(xù)的滲入確認(rèn)還是需要傳統(tǒng)微生物的方法進(jìn)行挑戰(zhàn)，如使用新的瓶子，可以在里面裝入WFI，進(jìn)行滅菌前后pH的測(cè)試，若下降則說(shuō)明有一定滲入。

包裝完整性測(cè)試指導(dǎo)原則上明確注明參照1101無(wú)菌檢查法進(jìn)行，進(jìn)行無(wú)菌實(shí)驗(yàn)的供試品、稀釋液、沖洗液、培養(yǎng)基、套筒，經(jīng)滅菌后按無(wú)菌檢查方法制成供試品管，按規(guī)定培養(yǎng)基的挑戰(zhàn)菌制備定量的新鮮菌液接入供試品管即可，我們是在制備好供試品管后在陽(yáng)性室接入陽(yáng)性菌的，也有企業(yè)直接將在沖洗液中加入定量的新鮮菌液，經(jīng)隔離器滅菌及holding time后直接按無(wú)菌檢查方法接入供試品管中，這樣挑戰(zhàn)更大，但是若菌株不生長(zhǎng)，可能無(wú)法判斷是否是因?yàn)榫杲?jīng)過滅菌及存放時(shí)間后死亡還是滅菌劑滲入導(dǎo)致的問題，當(dāng)時(shí)接入的量也必須同步確認(rèn)。

在隔離器內(nèi)使用的平板等，盡管平板廠家可能提供相應(yīng)的防止過氧化氫等一些滅菌劑滲入的證明報(bào)告，但是其驗(yàn)證時(shí)的劑量和時(shí)間和實(shí)際使用自己隔離器的劑量和時(shí)間不一致，所以我們必須還是要確認(rèn)，這個(gè)也可以使用促生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行滅菌前后的確認(rèn)。

無(wú)菌檢查用隔離器的篩選、驗(yàn)證及日常使用維護(hù)等其實(shí)是非常繁瑣的過程，如果有新的包裝或檢品進(jìn)行無(wú)菌檢查必須進(jìn)行包裝完整性測(cè)試進(jìn)行確認(rèn)，若未配套傳遞裝置，其滿載量必須考慮的非常周全，對(duì)于隔離器的使用我也是新人，所以該篇文章僅描述我們實(shí)驗(yàn)室的使用情況和一些經(jīng)驗(yàn)，大家可挑選相關(guān)內(nèi)容作為參考并結(jié)合各自企業(yè)特點(diǎn)進(jìn)行隔離器的篩選及管理。